RESUMO Objetivou-se neste estudo padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Microsporum canis em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. Foram selecionadas 48 amostras previamente identificadas por meio de cultura. Destas, 23 foram positivas para dermatófitos no cultivo. Padronizou-se a PCR a partir de primers desenhados para o alvo M. canis. Sessenta e um por cento (14/23) das amostras positivas para dermatófitos foram identificadas como M. canis em cultura. Desse total, 71,4% (10/14) apresentaram um fragmento de 218pb compatível com o esperado para a espécie fúngica alvo dessa reação. Observou-se uma sensibilidade de 71,4% e especificidade de 100% na PCR, além de uma boa concordância entre essas técnicas de diagnóstico (Kappa: 0,78; P<0,0001). O protocolo utilizado neste estudo apresentou alta especificidade na detecção de M. canis diretamente de amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos, viabilizando um diagnóstico mais rápido e específico, podendo esse protocolo ser empregado como um método confirmatório para agilizar a detecção de M. canis.

ABSTRACT The aim of this study was to standardize a Polymerase Chain Reaction protocol (PCR) for the detection of Microsporum canis in fur and/or crusts of dogs and cats. 48 samples previously identified by culture were selected. Of these, 23 were positive for dermatophytes in culture. PCR was standardized from drawn primers whose target is M. canis. A total of 61% (14/23) of the dermatophyte positive samples were identified as M. canis in culture. Of this total, 71.4% (10/14) presented a fragment of 218bp compatible with that expected for the fungal species target of the reaction. A sensitivity of 71.4% and specificity of 100% in the PCR were observed, in addition to a good agreement between the techniques (Kappa: 0.78; P< 0.0001). The protocol used in this study showed high specificity in the detection of M. canis directly from fur and/or crusts of dogs and cats, making possible a faster and more specific diagnosis. This protocol could be used as a confirmatory method, speeding the detection of M. canis.

RESUMO A imuno-histoquímica (IHQ) é considerada uma ferramenta rápida e precisa para a identificação de protozoários, como Toxoplasma gondii, em tecidos fetais e placentários. Neste estudo foi avaliada a imunodetecção de Toxoplasma gondii em tecido placentário de cabras naturalmente infectadas. Foram coletadas e analisadas 80 amostras de placentas de cabras procedentes de único rebanho com sorologia positiva para T. gondii na técnica de ELISA. Na histopatologia, 27/80 amostras apresentaram lesões sugestivas de infecção por protozoários. Após a avaliação histopatológica, procedeu-se à realização da técnica de imuno-histoquímica, obtendo-se 85,2% (23/27) de amostras com marcação positiva. A imunodetecção ocorreu no epitélio de revestimento das vilosidades coriônicas e foi classificada de acordo com o grau de intensidade da imunomarcação. Também foi evidenciada imunomarcação no interior dos vasos sanguíneos fetais em 8,69% (2/23) das amostras. Este estudo demonstrou que a técnica de IHQ se comportou como uma ferramenta valiosa no diagnóstico da infeção por T. gondii em tecido placentário de cabras naturalmente infectadas e complementou, de forma decisiva, o diagnóstico, além de agregar maior valor aos resultados obtidos nas análises histopatológica e sorológica.

ABSTRACT Immunohistochemistry (IHC) is considered to be a rapid and accurate tool for the identification of protozoa such as Toxoplasma gondii in fetal and placental tissues. In this study, we evaluated the immunodetection of Toxoplasma gondii in placental tissue from naturally infected goats. A total of 80 samples of goat placentas from a single herd with positive ELISA serology for T. gondii were collected and analyzed. In the histopathology, 27/80 samples presented lesions suggestive of protozoal infection. After the histopathological evaluation, the immunohistochemistry technique was performed, obtaining 85.2% (23/27) of samples with positive marking. Immunodetection occurred in the lining epithelium of the chorionic villi and was classified according to the degree of intensity of the immunostaining. Immunostaining within the fetal blood vessels was also evidenced in 8.69% (2/23) of the samples. This study demonstrated that the IHQ technique behaved as a valuable tool in the diagnosis of T. gondii infection in placental tissue of naturally infected goats completing the diagnosis in a decisive way and adding greater value to the results obtained in the histopathological and serological analysis.

RESUMO O objetivo deste estudo foi realizar uma investigação de Mycoplasma bovigenitalium e Ureaplasma diversum em bovinos leiteiros da microrregião do Vale do Ipanema, estado de Pernambuco, Brasil. Foram coletados suabes vaginais de 355 vacas em idade reprodutiva. As amostras foram analisadas por multiplex PCR (mPCR) e cultura. Foi realizada uma investigação dos fatores de risco para Mollicutes. Na mPCR, 9,29% (33/355) das vacas foram positivas para M. bovigenitalium e 21,69% (77/355) para U. diversum; coinfecção foi observada em 2,81% (10/355) das vacas. O isolamento microbiológico mostrou crescimento de Mycoplasma spp. em 81,81% (27/33) das amostras e em 24,67% (19/77) para Ureaplasma spp. Os fatores de risco relacionados à infecção por Mollicutes identificados foram sistema de produção semi-intensivo (OR= 4,6), aluguel de pastagem (OR= 3,6), não isolamento de animais com desordens reprodutivas (OR= 3,2) e monta natural e inseminação artificial (OR= 3,5). Houve uma associação significativa entre a infecção por Mollicutes e abortos no primeiro terço gestacional (P=0,001). Este é o primeiro relato da infecção por M. bovigenitalium e U. diversum em vacas na região semiárida do estado de Pernambuco, Brasil. As medidas preventivas direcionadas aos fatores de risco identificados podem diminuir a ocorrência de Mollicutes nesses rebanhos.

ABSTRACT The objective of this study was to conduct an investigation of Mycoplasma bovigenitalium and Ureaplasma diversum infections in cattle in the microregion of the Ipanema Valley, state of Pernambuco, Brazil. Vaginal swabs were collected from 355 breeding cows in reproductive age and were analyzed by multiplex PCR (mPCR) and culture. An epidemiological investigation of risk factors was performed for Mollicutes. mPCR analysis showed that, 9.29% (33/355) of the cows were positive for M. bovigenitalium and 21.69% (77/355) for U. diversum; coinfection was observed in 2.81% (10/355) of the cows. The microbiological isolation showed, 81.81% (27/33) of Mycoplasma spp. and 24.67% (19/77) of Ureaplasma spp.. The risk factors related to Mollicutes infection identified were semi-intensive breeding system (OR= 4.6), pasture rent (OR= 3.6), non-isolation of animals with reproductive disorders (OR= 3.2), and natural mounting and artificial insemination (OR= 3.5). There was a significant association between Mollicutes infection and abortions in the first gestational third (P= 0.001). This is the first record of M. bovigenitalium and U. diversum infection in cows in the semiarid region of the state of Pernambuco, Brazil. Preventive measures directed to the identified risk factors can decrease the occurrence of Mollicutes in these herds.